描述：

Caspase-3是凋亡过程中最主要的终末蛋白酶，也是研究最多的caspase；它激活pro-caspase-2,6,7,9，特异水解多种关键凋亡蛋白如PARP，介导染色质固缩、凋亡小体生成、核DNA断裂。测定原理基于Caspase-3特异水解多肽底物DEVD-pNA (Asp-Glu-Val-Asp-p-nitroanilide)，释放的游离硝基苯胺pNA在405nm有最大吸光度。采用可见光光度比色法测定pNA而得到Caspase活性。适用于检测哺乳动物组织、细胞Caspase-3活性。

组成 (所示为100次检测, 50次检测试剂量减半)

1. 裂解缓冲液20ml, 4 ºC

2. 反应缓冲液10ml, 4 ºC

3. 底物 0.5ml, -20 ºC避光

4. 10mM pNA标准品0.2ml, -20 ºC避光

试剂常温运输，到达后按要求储存，1年内稳定。

所需仪器：

可见光分光光度计配100μl比色杯，或酶标仪。最佳波长405nm，也可测OD400~450nm但灵敏度略降。

说明：

1. Caspase酶活力单位定义：参考Chemicon公司One unit is the amount of enzyme that will cleave 1.0 nmol of the colorimetric pNA-substrate per hour at 37 ºC under saturated substrate concentrations。即当底物饱和时,一个Caspase酶活力单位定义为37 ºC 1小时水解pNA底物，产生1nmol游离pNA。根据pNA标准曲线和样品OD值，可计算出Caspase酶活力单位。

2. 除了处理组外，可设置阳性凋亡诱导剂组，阴性实验对照可包括不具有凋亡诱导作用的试剂(如果能得到)处理组、溶剂对照组、或凋亡诱导零时间点。